液相色谱仪检定中的影响因素及解决方法

液相色谱仪检定中的影响因素及解决方法

液相色谱法简介
在经典液相色谱的基础上，引入了气相色谱的理论与技术，在70年代初建立了高效液相色谱分析法（HPLC）。根据液相色谱理论，随着载液（流动相）流速的提高，板高则增大，所以柱效会降低。随着技术的提高，人们制成了细小（<10μm）而高效的填充物，从而使柱效大大提高。但是随着填充物粒度的减小，柱压降显着增大，为了得到合理的载液流速，使用了高压输液泵，使流速达到（1~10）mL/min。从而使分析一个多组分样品只需几分钟到几十分钟时间。随着高效固定相、高压泵和高灵敏度检测器以及电子技术和计算机技术的应用，70年代以来逐步实现了液相色谱分析的高效、高速、高灵敏和自动化操作。高效液相色谱法适于分离、分析沸点高、热稳定性差、分子量大的许多有机物和一些无机物，而这些物质占化合物总数的（75~80）%，因此它已广泛应用。
本文根据JJG 705-2002液相色谱仪检定规程，对检定过程中可能遇到的影响因素进行分析。

液相色谱检定条件的选择
进行液相色谱检定时，按照一定的程序，有目的地选择分析方法，才可能得到好的分析结果。
1.柱子的选择
在液相色谱分析方法中最重要的就是色谱柱的选择。现在大部分液相色谱分析都是使用反相色谱柱，其中以C18和C8柱最为流行。在大多数情况下，使用这两种柱子都能获得理想的分离效果。柱子性能稳定，重现性也好，分离后峰的形状也不错。
2.柱子大小的选择
液相色谱分析时柱子选择的另一个因素就是柱子大小、填充颗粒的直径（dp）的选择。最常用颗粒直径为5μm。颗粒的dp小意味着可以获得较高的理论塔板数，但所需的柱压增大，而且色谱柱易堵塞。 实验室中经常使用的是（150mm×4.6mm，dp为5μm）和（ 250mm×4.6mm，dp为5μm）的色谱柱。在一般情况下流速可设定为1ml/min。
3.有机溶剂的选择
获得成功分离的另一个重要因素就是流动相有机溶剂的选择，每一种溶剂都有其独特的优点。考虑到理想溶剂的特点，如粘度低、紫外吸收弱、与样品不相互作用，而且使用方便，所以甲醇、乙腈作为有机溶剂较为常见。
对于紫外检测器和二极管检测器，检测波长设定为254nm，利用甲醇作为流动相，在柱压较低的条件下，流速可控制在（1~2）ml/min之间。
4.其它的因素
还应考虑到其它的一些因素，比如温度。温度变化１℃，保留时间将变化（1~3）％，温度的变化还影响色谱柱的选择性。在分析时柱温一般比室温高一点，因为此时温度易控制，而且在低压下有利于降低溶剂的粘度，从而降低柱压。检定过程中，温度变化不超过3℃。

受益非浅,在次谢过啦.

好肤浅,在工作中并没有没有实质用处

请你发表高深、有帮助的帖子。

很受益呀,虽然很多大家 都明白的,但很少向版主那样好好总结

这些都 是常规的检定知识，用处不大！！

通常情况下，连接数据工作站时，岛津的仪器选择AUX为2，这样采集的电压信号1mV才对应1mAU。若是输出模拟信号，还要注意量程范围range应该选择0.01（仪器的信号输出设置为10mV时）这样信号才是1：1的。依此类推，大家检定的时候一定要先了解仪器量程和AUX以及输出端口的mV设置，必免出现虚假的噪声过大或者噪声过小的状况。Waters和安捷伦的默认设置就不一样，W一般设为2V，A一般设为0.01V

另外检定示差折光检测器时，规程上要求用C18柱。这时一定要注意必须用水性的C18柱，不能是一般的那种。其实很多用这种检测器的单位都配有糖柱，糖柱应该更合适