示差折光检测器高效液相色谱仪的检定操作规程

1. 说明
1.1. 适用范围：适用于RID-10A型示差折光检测器液相色谱仪校正。
1.2. 参照依据：依国家技术监督局JJG705-2002“实验室液相色谱仪检定规程”及《中国药典》2005年版二部附录VH制定。
1.3. 器操作及环境：应符合本仪器操作及维护保养规程。
2. 检定项目和技术要求
2.1. 泵流量设定值误差：Ss应≤±2%；重复性误差：SR应≤±2%
2.2. 柱温箱温度设定值误差ΔTs：应不超过±2.0℃；柱温箱温度稳定性：应不超过1.0℃。
2.3. 基线漂移：应≤5×10-6RIU/h；基线噪声：应≤5×10-7 RIU。
2.4. 最小检测浓度：应不超过5×10-6g/ml丙三醇/水溶液。
2.5. 定性测量重复性误差(6次定量环进样)应RSD≤1.5%。
2.6. 定量测量重复性误差(6次定量环进样)应RSD≤1.5%。
3. 检定方法
3.1. 泵流量设定值误差Ss，流量稳定性误差SR的检定
3.1.1. 仪器与用具
     分析天平   万分之一
     秒表       精度1/100秒
     容量瓶     50ml
3.1.2. 操作程序
3.1.2.1. 将泵、进样器、色谱柱和检测器连接好，以甲醇为流动相。
3.1.2.2. 按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先精密称定过重量的容量瓶收集流动相，同时用秒表记录，准确收集10～25分钟，再精密称定其重量。收集时间
符合表1规定，每个设定值重复测定3次。
3.1.3. 结果计算
按下列公式计算SS和SR：
Fm=（W2-W1）/（P.t）
SS=（Fm-FS）/FS×100%
SR=(Fmax-Fmin)/F×100%
W2为容量瓶+流动相的重量(g)
W1为容量瓶的重量
P为实验条件下的流动相密度(g/cm3)
t为收集流动相的时间(min)
Fm为流量实测值(ml/min)
FS为流量设定值
Fmin为同一组测量中流量最小值
Fmax为同一组测量中流量最大值
F为同一组测量中流量的算术平均值
3.1.4. 结果判断：SS和SR值应符合下表规定
流量设定值(ml/min)        0.5        1.0        1.5
测量次数        3        3        3
收集流动相时间(min)        25        15        10
允许误差        SS        3%        2%        2%
        SR        3%        2%        2%
3.1.5. 注意事项：收集时间应将“秒”换算为“分”代入公式计算。
3.2. 柱温箱温度设定值误差ΔTs、柱温箱温度稳定性Tc的检定
3.2.1. 操作程序：将温度设为40℃，将一经过校正的温度计放入柱温箱内，每隔10min读取温度计显示温度与柱温箱显示温度一次，共读取7次，求出平均值。
3.2.2. 结果计算：
ΔTs=平均值与设定值之差
Tc=7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性。
3.2.3. 结果判断：柱温箱温度设定值误差ΔTs应不超过±2.0℃；柱温箱温度稳定性应不超过1.0℃。
3.3. 基线漂移和基线噪声的检定
3.3.1. 色谱条件
色谱柱：C18
流动相：水
流速：1ml/min
数据处理：龙智达GPC色谱工作站
3.3.2. 操作步骤
将仪器各部份联接好（检测器接10mv输出口），接通电源，以水为流动相，流速为1ml/min，量程范围选择0.01×10-6RIU，工作站放大倍数为5，启动泵，待基线稳定后记录基线30min和60min，根据检测器衰减的倍数和测得的基线峰-峰高对应的记录仪标度，按下式计算基线噪声和基线漂移，用检测器自身的物理量（RIU）表示。
3.3.3. 计算公式：
             A×0.01×10-6
基线噪声=-----------------------
              10×5

B×0.01×10-6
基线漂移=-----------------------
             10×5
式中：
10—检测器输出电压为10mv；
5—工作站放大倍数；
0.01×10-6—为设置量程，RIU；
A—所记录基线30min内，基线最大峰-峰高对应的值，mv；
B--所记录基线60min内，基线偏离原点的值，mv/h。
3.3.4. 结果判断：
基线漂移应≤5×10-6RIU/h；
基线噪声应≤5×10-7 RIU。
3.4. 最低检测浓度的检定
3.4.1. 对照品溶液的配制：配制含丙三醇5×10-6g/ml的水溶液。
3.4.2. 色谱条件：
色谱柱：C18        流动相：水       流速：1ml/min     进样量：20ul（定量环）
数据处理：龙智达GPC色谱工作站
3.4.3. 操作步骤：将仪器各部份联接好（检测器接10mv输出口），接通电源，以水为流动相，流速为1ml/min，量程范围选择0.01×10-6RIU，工作站放大倍数为5，启动泵，待基线稳定后，将上述
配制好的对照品溶液进样，记录色谱图。
3.4.4. 按下式计算最小检测浓度：
              Cl=2•Nd•C/H
式中：
Cl：最小检测浓度（g/ml）；
Nd：基线噪声峰-峰高，mv；
C：对照品溶液浓度（g/ml）；
H：标准溶液的色谱峰高，mv。
3.4.5. 结果判断：最低检测浓度应不超过5×10-6g/ml（丙三醇/水溶液）。
3.5. 定性、定量重复性试验
3.5.1. 色谱条件
色谱柱：C18
流动相：水
流速：1ml/min
进样量：10ul（定量环）
数据处理：龙智达GPC色谱工作站
3.5.2. 操作程序
将仪器各部份联接好（检测器接10mv输出口），接通电源，以水为流动相，流速为1ml/min，量程范围选择1×10-6RIU，工作站放大倍数为5，启动泵，待基线稳定后，用进样阀的定量环注入10ul1×10-3g/ml的丙三醇水溶液，连续进样6次，记录丙三醇的峰保留时间和峰面积。
3.5.3. 结果计算：

式中：
RSD%--定性（定量）测量重复性相对标准偏差；
Xi--第i次测得的保留时间或峰面积；
--6次测量结果的算术平均值；
i--测量序号。
3.5.4. 结果判断
定性测量重复性误差：6次峰保留时间相对标准偏差(RSD)应≤1.5%。
定量测量重复性误差：6次峰面积相对标准偏差(RSD)应R≤1.5%。
4. 检定周期
4.1. 法定检定周期为1年。
4.2. 仪器维修或发现异常时应全面检定一次。