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OLYMPUS AU400型全自动生化分析仪计量检测方法探讨
李晓丽
一、生化分析仪计量现状 生化分析仪是医院必不可少的检查仪器，生化项目测定、激素、免疫球蛋白、血药浓度等特殊化合物的测定以及酶免疫、荧光免疫等分析离不开生化分析仪。随着国民经济的高速发展，科学技术的不断进步，以往的半自动生化分析仪逐渐被全自动生化分析仪所取代，在各级医疗卫生机构中广泛使用。全自动生化分析仪是将生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温、比色、结果计算、书写报告和清理等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成。全自动生化分析仪的准确性如何，直接影响着医生对病人病情的判断，这就对计量部门检测生化分析仪提出了更高的技术要求。JJG464-1996《生化分析仪》检定规程相对于全自动生化分析仪的检定来说，有一定的局限性。
二、普通检测方法存在的问题 检测全自动生化分析仪普通方法是通过加样针在样品(检测用标准物质)中加入反应试剂(相同的标准物质)，搅拌均匀后，由泵依次吸至比色池中进行比色，经信号处理后，记录或打印出结果。即采用全自动生化分析仪分析样品时的工作程序来检测标准物质的吸光度，或者采用直接把标准物质放入试剂盒中，用测定试剂空白的方法检测标准物质的吸光度。根据笔者的经验，这两种方法检测出的吸光度数值比实际值偏低，其原因是这种方法引入了试剂针和样本针在清洗过程后残留的清洗液，这对标准物质起到了稀释的作用。根据朗伯-比尔定律，物质的浓度降低，吸光度也会随之减小。
三、使用探讨检测方法检定全自动生化分析仪举例 由于普通检测方法存在检测出的吸光度数值比实际值偏低的问题，我们在检定时一般将通过加样针在样品中加入反应试剂的过程跳过，直接手动将标准物质添加至比色杯中，我们称之为探讨检测方法。下面以OLYMPUS AU400型全自动生化分析仪为例，来阐述探讨检测方法的检测流程。
1.准备工作
(1)启动系统，系统将进行初始化(Initialization)及预热(Warm-Up)操作，并转到待机(Stand by)状态。等待20min以上，使光源灯稳定。
(2)将仪器置于停机(Stop)状态下。取下清洗系统及搅拌棒，打开比色杯轮盘系统的盖子，露出比色杯。选择350μL的移液器一把，依次将蒸馏水、亚硝酸钠标准溶液、吸光度标准溶液1-1、1-2和质量浓度为2.0g/L、4.0g/L、6.0g/L、8.0g/L、10.0g/L的氯化钻标准溶液分别加至比色杯中。注意:加样前应确保比色杯干燥，无残留清洗液。加样时避免产生气泡，以免影响检测结果。加样完成后盖上盖子。
2.开始测试
在保养[Maintenance]菜单内选择主要保养[Maker Maintenance]子菜单，点击ANL Diag(分析仪诊断)。
依次按以下步骤操作:Combination(综合)→A/0-100%(Abs)→Print,No□(在此选择要打印比色杯的编号)，点击YES开始测试。
3.结果读数
测试完成后，在界面上会显示每个反应杯在各波长下测试的吸光度值(注意:这里的吸光度值都是×10000后的值，如安装打印机即可将结果打印出来)。各装有标准物质比色杯的吸光度值与相应波长下装有蒸馏水的比色杯的吸光度值(即杯空白)之差为该比色杯内溶液在该波长下的吸光度。
4.清洗比色杯
读数完成后，将清洗系统及搅拌棒复位。当分析过程被强制停止后，应作一次清洗1(W1)来清洗比色杯内残留的试剂。
(1)在“系统状态”屏幕下按F5(W1)清洗1键。为进行清洗1，将对系统各部分复位，如果在复位中发现严重问题(如清洗系统复位不正常)，将不能执行W1命令。
(2)按“YES”钮，开始清洗1过程，清洗比色杯内部。执行W1时，运行过程的状态将显示在对话框内，W1约需9min。
由于全自动生化分析仪的工作原理基本相同，该方法适合绝大部分全自动生化分析仪的检测，只是不同型号的全自动生化分析仪工作界面和操作方法有所不同，笔者在此不再赘述。
四、普通检测方法和探讨检测方法检定数据的比较 下面仍以OLYMPUS AU400型全自动生化分析仪为例，以标准值为0.490和0.979的吸光度标准溶液1-1和1-2为检定用标准物质，在相同条件下对同一台OLYMPUS AU400型全自动生化分析仪吸光度准确度采用3种方法各检测8次，对得出的吸光度准确度的数值进行记录，得出表1、表2(表中:I1为全自动生化分析仪分析样本时的操作程序，即试剂盒和样本盒放入同一种标准物质，此时试剂针和样本针同时参与检测工作；I2为将吸光度标准溶液放入试剂盒中，通过检测试剂空白的方法测得的吸光度数值，此时试剂针参与检测工作；I3为将吸光度标准溶液通过移液器直接加入比色杯中进行检测的吸光度数值，即探讨检测方法； 为测量平均值；ΔI为测量平均值与标准值之差，即吸光度准确度)。
<CTSM> 表1 标准值为0.490时吸光度准确度</CTSM>
<CTSM> 表2 标准值为0.979时吸光度准确度</CTSM>
由上述检测方法得出的数据可以看出，使用全自动生化分析仪分析样本时的操作程序，即试剂盒和样本盒放入同一种标准物质得出的吸光度准确度分别为-0.039和-0.066，根据JJG464-1996判定C级合格。将吸光度标准溶液放入试剂盒中，通过检测试剂空白的方法测得的吸光度准确度分别为-0.018和-0.040，根据JJG464-1996判定B级合格。而采用探讨检测方法测得的吸光度准确度分别为-0.006和-0.011，根据JJG464-1996判定可以达到A级合格。
五、现有规程有待完善 通过对全自动生化分析仪的普通检测方法和探讨检测方法检定数据的比较，可以得出以下结论:现有检定规程对于全自动生化分析仪的计量检测有一定的局限。尤其是吸光度准确度这一项，受清洗系统、加样系统的影响较大，使用普通的检定方法会给全自动生化分析仪的计量检测带来不可避免的误差。
六、结束语 综上笔者认为，对全自动生化分析仪进行检测时，应该使用探讨检测方法，这样可以有效地避免残留清洗液对标准物质的稀释影响，更准确直接地反映比色杯的工作性能。
作者单位【北京市海淀区计量检测所】 | 
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